Endometriyal endotel hücrelerinde in vivo BİP ekspresyonu ve BİP'in inflamatuar sitokinler TNF-alfa ve İnterlökin 1 (IL-1) beta tarafından in vitro düzenlenmesi
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Dokuz Eylül Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü, Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2011
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: NEHİR ŞERİFE OCAK
Danışman: HÜSNÜ ALPER BAĞRIYANIK
Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu
Özet:Amaç:Bu tezde insan endometriyal endotel hücre (HEEC) lerinde inflamatuvar sitokinlerin etkisiyle meydana gelen endoplazmik retikulum (ER) stresine bağlı katlanamayan protein cevabın (UPR) düzenlenmesinin incelenmesi hedeflendi.Yöntem:Çalışmada in vivo menstrual siklusun ve erken gebeliğin farklı dönemlerine ait 35 doku örneğinde BİP ile immunohistokimya boyamaları yapıldı. İn vitro olarak ise HEEC izolasyonu ve kültürü yapıldı. Kültürdeki HEECler pasajlandıktan sonra 4 gözlü lamlara ve 96 gözlü mikropleytlere ekildi. 4 gözlü lamlara ekilen HEECler inflamatuvar sitokinlerle 24 ve 48 saat uyarıldı. Deney sonunda fikse edilen HEEClere BİP, fosfo- ve total-eIF-2? immunositokimya ve TUNEL tekniği uygulandı. Doksan altı gözlü mikropleytlere ekilen HEECler ise, 24 ve 48 saat inflamatuvar sitokinler, UPR inhibitörü TUDCA ve UPR uyaranı tunikamisinle uyarılarak MTS ve ELİSA teknikleri ile analiz edildi. Ayrıca inflamatuvar sitokinler ve ovaryan hormonlarla sitimüle edilen HEEClerde BİP ve eIF-2?'nın seviyesi ve eIF-2?'nın fosforilasyon düzeyi Western blot tekniği ile belirlendi.Bulgular:İn vivo endometriyal doku ve erken gebeliğe ait desidual doku endotel hücrelerinde, BİP immunoreaktivitesinin HSCORE değerlendirilmesi ile normal menstrual siklus boyunca geç sekresyon fazında en yüksek; erken gebelikte ve orta sekresyon fazında ise en düşük BİP immunoreaktivitesi saptandı.İn vitro koşullarda tunikamisinle uyarılan HEEClerde kontrole kıyasla, MTS sonucunda ortaya çıkan hücre sayısındaki anlamlı azalmanın, doz bağımlı olduğu izlendi. Ayrıca, IL- ?? 'nın kontrole göre hücre sayısındaki arttırıcı etkisi TUDCA ile birlikte verildiğinde, ortadan kalktı.TUNEL tekniği kullanılarak TNF-? ile uyarılmış HEEClerde kontrole kıyasla daha fazla apoptoza uğramış hücre görüldü.HEEClerin tunikamisin ile doz bağımlı olarak ve TNF-? ile uyarıldığında IL-8 sekresyonunu anlamlı olarak arttırdığı saptandı. Tunikamisinin bu etkisinin, TUDCA ile birlikte uygulandığında anlamlı olarak azaldığı gözlendi. TUDCA, TNF-?'nın da anlamlı etkisini ortadan kaldırdı.Ovaryum steroidleri ile uyarılmış HEEClerde BİP ve eIF-2? protein seviyesi, kontrole göre anlamlı bir farklılık göstermedi, fakat eIF-2?'nın fosforilasyon seviyesi incelendiğinde progesteronun; kontrol, östrojen ve östrojen+progesteron gruplarına kıyasla anlamlı olarak azaltıcı etkisi saptandı. Ayrıca, HEEClerin inflamatuvar sitokinlerle uyarılması sonucunda BİP seviyesinin ve eIF-2? proteininin fosforilasyon seviyesi kontrole göre anlamlı olarak artış gösterdi. Aynı deneyin immunositokimyasal analizleri de bu Western blot sonuçlarımızla paraleldi.Sonuç:Bulgularımıza dayanarak UPR sinyal yolağının insan endometriyumununda endotel hücre proliferasyonun ve apoptozunun moleküler kontrolünde rol aldığını ve bu sürecin menstrual siklus bağımlı olarak kontrol edildiği söylenebilir. Ayrıca bulgularımız inflamatuvar sitokinler TNF-? ve IL-1ß'nın HEEClerde UPR sinyalinin aktivasyonundan sorumlu moleküllerden iki tanesi olabileceğini göstermektedir.