Tavşanlarda limbal eksplanttan çıkan limbal kök hücrelere farklı büyüme ortamlarının ve eksplantın ekildiği farklı yüzey materyallerinin etkisi

---

Tezin Türü: Yüksek Lisans

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Dokuz Eylül Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü, Biyokimya Ana Bilim Dalı, Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 2014

Tezin Dili: Türkçe

Öğrenci: MEHMET GÜRDAL

Eş Danışman: İSMET DURAK, KEMAL BAYSAL

Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu

Özet:

Gözümüzün ön yüzeyini oluşturan kornea, görebilmemizi sağlayan bir dokudur. Kornea epitelinin sürekli yenilenerek işlevsel olmasını limbusta yer alan kök hücreler sağlamaktadır Herhangi bir nedenle kök hücrelerin fonksiyon gösterememesi, korneanın tamamen opaklaşarak ciddi görme kaybına neden olmaktadır. Limbal kök hücre yetmezliği olarak tanımlanan bu patoloji için günümüzde en geçerli tedavi yaklaşımı limbal epitelyal eksplant kültürü ile çoğaltılan limbal kök hücre naklidir ve klinik başarı nakledilen limbal kök hücrelerin yüksek sayıda olmasına bağlıdır. Eksplanttan çıkan limbal kök hücrelerinin oranının artırılması, maksimal kök hücre çoğalmasını sağlayan hücre kültür ortamının ve eksplantın yerleştirildiği yüzey materyalinin optimizasyonu ile sağlanabilir, bu konuda kapsamlı yayınlar yoktur. Bu çalışmada biz, farklı büyüme ortamlarının ve farklı yüzey materyallerinin Yeni Zelanda tavşan limbal epitelyal eksplant kültüründen çoğaltılan hücre popülasyonu içerisindeki kök hücre oranı üzerine etkisini araştırdık. Çalışmada hücre büyüme ortamı olarak, DMEM-F12 kontrol grubunu oluşturmak üzere karşılaştırma amacıyla pluripotin, otolog serum, Epilife, KSFM, D-KSFM ve hücre büyüme ortamları olarak seçilmiştir. Yüzey materyali olarak, insan amniyotik membranı kontrol grubunu oluşturmak üzere karşılaştırmak amacıyla kollajen I ve poröz PET membran seçilmiştir. Kültür sonrası elde dilen hücrelerin protein ekspresyonu immünfloresan metod ile ve gen ekspresyonu real time PZR ile belirlenip farklı koşullar karşılaştırılmıştır. Büyüme ortamları içerisinde en yüksek hücre sayısı elde edilen ve protein ekspresyonu düzeyinde sitokeratinler bakımından yüksek limbal kök hücre oranı sağlayan KSFM'dir. Farklılaşmış hücre işaretleyicilerinin protein ekspresyonları, Epilife dışında diğer büyüme ortamlarında anlamlı olarak düşmektedir. Bir yüzey materyali olarak PET, iAM ile benzer kök hücre oranı sağlarken, Kollajen I Jel limbal epitelyal eksplant kültüründe limbal kök hücrelerinin çoğalmasını desteklememektedir.