Genç ve yaşlı deri fibroblast hücrelerarası kuvvetlerinin, HP (high throughput) bioforce sistem ile, biyofiziksel ve ultrastrüktürel düzeyde değerlendirilmesi ve CTGF, colLA1, MMP1 gen ifadelerinin karşılaştırılması


Tezin Türü: Yüksek Lisans

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Dokuz Eylül Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü, Tıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı, Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 2014

Tezin Dili: Türkçe

Öğrenci: GÖZDE DURSUN

Danışman: SEFA KIZILDAĞ

Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu

Özet:

Mekanik tansiyon hücrelerde gen ifadesi, hücre metabolizması, hücresel tansiyon ve hücreler arasında tansiyon aktarımı gibi bir çok hücresel süreci etkilemektedir. HP Bioforce sistemi in vitro hücre kuvvetlerinin ölçümü için geliştirilen yeni bir teknolojidir. Bu sistem silikon ince membran üzerindeki hücre ya da doku tabakalarını mikrometre garalığında indükleyen küçük miktarlarda kuvvetler oluşturur. Thrombin endotelyal hücreler ve stres fiberlerinde tansiyonu, endotelyal hücre bariyer geçirgenliğini arttırdığı iyi bilinen bir enzimdir. Hücresel kuvvetlerin ölçümleri ile ilgili önceki çalışmalarda thrombin, hücre kontraktil tansiyonunu arttırıcı bir faktör olması sebebi ile bu çalışmalarda pozitif kontrol olarak kullanılmıştır. TGF-β ise doku yenilenmesi ve matriks formasyonundaki önemi sebebiyle sıklıkla çalışılan bir sitokinindir. TGF-β'nın ayrıca fibroblast kontraktilisini arttırdığı bilinen α-smooth muscle aktin (α-SMA) ifadesini de düzenlediği düşünülmektedir. Bu çalışmada HP Bioforce sistemi kullanılarak monolayer olarak kültive edilen yaşlı ve genç dermal fibroblastlar arasında thrombin, TGF β ve içeriği bilinmeyen beş farklı substansın uygulandığı monolayer yaşlı ve genç dermal fibroblast hücre grupları arasındaki hücresel kuvvetler ölçüldü. Çalışmanın ikinci aşamasında ise genç (18, 29 yaş) ve yaşlı (59, 73 yaş) dermal fibroblast hücre gruplarında ekspresyonu farklı olacağı düşünülen kollagenaz enzimi geni MMP1, kollajen tip 1 alfa proteinini sentezleyen COL1A1, bağ doku faktörü olan CTFG gen ekspresyonları gerçek zamanlı PCR tekniği ile incelenmiştir. Sonuçlara göre thrombin genç hücrelerde hücresel kuvvetleri TGF beta'nın ise yaşlı hücrelerde hücresel kuvvetleri önemli ölçüde arttırdığı sonucuna ulaşılmıştır. Yapılan gen ifadeleri çalışmalarında ΔΔCt formülü kullanılarak yapılan hesaplama sonucunda ise yaşlı hücrelere göre genç hücrelerde MMP1 gen ifadesinin 1,71 kat azaldığı, COL1A1 gen ifadesinin 1,89 kat arttığı ve CTGF gen ifadesinin 1,53 oranında azaldığı gözlenmiştir.