DNA VE RNA İZOLASYONU


Tan A., Aysal Ağalar A., Sağol Ö.

MOLEKÜLER PATOLOJİ LABORATUVAR YÖNTEMLERİ VE BİYOİNFORMATİK YAKLAŞIM, Sülen Sarıoğlu, Editör, O'Tıp Kitabevi ve Yayıncılık, İzmir, ss.85-103, 2022

  • Yayın Türü: Kitapta Bölüm / Mesleki Kitap
  • Basım Tarihi: 2022
  • Yayınevi: O'Tıp Kitabevi ve Yayıncılık
  • Basıldığı Şehir: İzmir
  • Sayfa Sayıları: ss.85-103
  • Editörler: Sülen Sarıoğlu, Editör
  • Dokuz Eylül Üniversitesi Adresli: Evet

Özet

Nükleik asitlerin izolasyonu, organik olarak bozulmaya uğramamış hücresel yapılardan özel solüsyonlar ve yöntemler kullanılarak bu moleküllerin ortaya çıkarılmasıdır. Başarılı bir moleküler analiz için ilk adım uygun miktarda ve kalitede nükleik asit eldesidir. Rutin patoloji pratiğinde tanı ve tedavi amacıyla uygulanacak moleküler analizler için nükleik asit eldesi parafin bloklar, sitolojik preparatlar ve boyalı kesitlerden (Hematoksilen-Eozin, immünhistokimya ve histokimya boyalı kesitler) yapılabilir. Uygun hastalarda taze doku ve dolaşan tümör hücrelerini inceleyen likid biyopsi de tercih edilebilir. DNA izolasyonu emek gerektiren bir işlemdir. İzolasyon sonucunda uygun saflık ve konsantrasyonda nükleik asit elde edilebilmesinde, doku ya da sıvıların geçirdiği preanalitik süreçlerin etkisi büyüktür. Kaliteli nükleik asit eldesi için doğru örnek seçimi çok önemlidir. İzolasyon işlemine başlarken hem RNA hem de DNA için önce uygun örnek seçilir ve hazırlanır, gerekiyorsa deparafinizasyon uygulanır. Bundan sonra izolasyonun üç temel basamağı olan lizis, saflaştırma ve çökeltme aşamaları gerçekleştirilir. Bu aşamalardan sonra konsantrasyon ve kalite ölçümleri yapılır. Bu bölümde moleküler patolojik değerlendirmelerin en temel aşamasındaki preanalitik ve analitik süreçlerle ilgili ayrıntılı bilgi verilmiş ve DNA-RNA izolasyon basamakları ayrıntılarıyla anlatılmıştır.