Tiroid kanser hücre hattında kollajenazların lokalizasyonunun ve aktivitesinin belirlenmesi amacıyla in situ kollajen zimografi yönteminin geliştirilmesi

Yükseköğretim Kurumları Destekli Proje, BAP Y.Lisans, 2021 - 2022

Proje Türü: Yükseköğretim Kurumları Destekli Proje
Destek Programı: BAP Y.Lisans
Başlama Tarihi: Nisan 2021
Bitiş Tarihi: Nisan 2022

Proje Özeti

Tiroid kanseri en sık görülen ve görülme sıklığı her geçen gün artan endokrin kanserdir. Tiroid ve diğer kanserlerin tanı ve tedavilerinin doğru yapılabilmesi için birçok çalışma yapılmaktadır. Yapılan çalışmalardan elde edilen bilgilere göre Matriks metalloproteinazlar (MMP) ailesine ait olan kollajenazların (MMP-1, -8 ve -13) tümör oluşumu, invazyonu, metastazı ve kemoterapik ajana karşı direnç oluşumu gibi kanser üzerindeki etkileri bulunmuştur. Bunun sonucunda da tümör mikroçevresi kanser çalışmalarında yeni odak noktası haline gelmiştir. Kollajenazların analizinde kollajen jel zimografi ve in situ kollajen zimografi gibi yöntemler kullanılmaktadır. Her iki yöntemin de kendi aralarında avantajları ve dezavantajları bulunmaktadır. Kollajen jel zimografi ile kollajenazlar ayrı ayrı analiz edilebilir, fakat ölçülen aktivite değeri fizyolojik aktivite değil kollajenazların potansiyel aktivitelerini gösterir. Bunun yanında hücre veya doku içerisindeki konumları hakkında bilgi vermez. İn situ kollajen zimografi ise kollajenazların sadece doku örneği içerisindeki lokasyonlarının belirlenmesine ve fizyolojik aktivitelerinin semi-kantitatif olarak ölçülmesine olanak tanır. Ayrıca MMP'lerin birden fazla substratı degrade edebilmesinden ötürü bu yöntemde substrat spesifikliği sağlanamaz ve substratı degrade eden tüm enzimler sinyal oluşturur. Bu projenin amacı kollajenazların çinko ile fikse edilmiş tiroid kanser hücre hattında (8505C) lokasyonlarının ve aktivitelerinin analiz edilmesine olanak sağlayacak "in situ kollajen zimografi" yöntemini geliştirmektir. Diğer amacı ise yöntem geliştirildikten sonra seçici inhibisyon yoluyla kollajenazların lokal aktivitelerinin ayrı bir şekilde ölçülmesidir. Bunun için 8505C hücre hattında 5 farklı çinko fiksasyonu denenecek ve bunlardan en uygun olanı belirlenecektir. Bunun ardından floresan mikroskopi ile kollajenazların lokasyonları görüntülenecek ve aktiviteleri ölçülecektir. Kollajenazların lokal aktiviteleri ayrı olarak immünsitokimyasal yöntemler ve seçici inhibisyon ile iki farklı şekilde ölçülecek ve sonuçlar karşılaştırılacaktır. Kollajenazların geleneksel ölçüm yöntemi olan kollajen jel zimografi yönteminden elde edilen sonuçlar ile çinko fiksasyonunun enzim aktivitesi üzerine olan etkisi belirlenecektir. Hücreler belirli bir süre -80°C'de depolanacak, belirli periyodlarla (3., 6., 9. ve 12. aylar) yapılan ölçümler ile çinko fiksasyonun enzim depo kararlılığına olan etkisi belirlenecektir.